通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產(chǎn)品簡(jiǎn)介

莫洛尼鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV RT）是一種RNA依賴(lài)的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）轉(zhuǎn)錄為cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相對(duì)于禽成髓細(xì)胞瘤病毒反轉(zhuǎn)錄酶較弱，更適合用來(lái)反轉(zhuǎn)錄較長(zhǎng)的mRNA。M-MLV RT應(yīng)用于以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈。

注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉(zhuǎn)錄酶，因此要得到和用AMV 反轉(zhuǎn)錄酶一樣產(chǎn)量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)使用方法

1）使用方法簡(jiǎn)介以用2mg總RNA為例。在無(wú)RNase離心管中，加入0.5mg引物至含總RNA的樣品中，總體積不大于15ml。70℃，5分鐘打開(kāi)模板鏈形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)。立即放于冰上降溫防止二級(jí)結(jié)構(gòu)恢復(fù)，隨后短暫離心使液體集中在離心管底。

2）加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。

注意：不要改變引物的加入比率。

M-MLV 5×Reaction Buffer                       5ml

dATP，10mM                                 1.25ml

dCTP，10mM                                 1.25ml

dGTP，10mM                                 1.25ml

dTTP，10mM                                 1.25ml

Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor         25 units

M-MLV RT                                    200 units

無(wú)核酸水至最后體積 25ml

3）輕輕混勻離心管，如果使用隨機(jī)引物在37℃孵育60分鐘，其他引物則42℃孵育。延伸溫度在37～42℃之間最佳。

4）M-MLV RT 用于合成cDNA的第一鏈。往后的合成則需要根據(jù)需要自行設(shè)計(jì)引物再次合成。

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)Buffer組成

M-MLV RT 5×Reaction Buffer

250mM     Tris-HCl（PH 8.3 室溫下）

375mM     KCl

15mM     MgCl₂

50mM     DTT

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)來(lái)源

大腸桿菌表達(dá)純化

通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)保存條件

-20℃保存。避免經(jīng)常凍融。