核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過(guò)程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來(lái)。得到的蛋白可以用于Western blot等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒通過(guò)漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過(guò)離心得到細(xì)胞核。然后通過(guò)核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100個(gè)樣品（每個(gè)樣品約2×10⁶個(gè)Hela細(xì)胞或40mg組織）。

規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存：核/漿蛋白抽提試劑4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。

操作方法：

裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

一、對(duì)于體外培養(yǎng)細(xì)胞：

1．根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加，可以在兩種蛋白抽提液中加入DTT至終濃度0.5mM。

2．對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用PBS洗一遍，用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞，或用EDTA消化后吹打下細(xì)胞。500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清留下沉淀備用。

3．對(duì)于懸浮細(xì)胞：用PBS洗一遍，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。

4．每20μl細(xì)胞沉淀加入200μl漿蛋白抽提試劑（2×10⁶個(gè)細(xì)胞沉淀的體積約20μl或40mg）。

5．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長(zhǎng)），必須使細(xì)胞沉淀分散開(kāi)成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞沉淀分散不會(huì)導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低。

6．冰浴10分鐘。

7．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃ 12000～16000g離心10分鐘。

8．上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白，立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中備用，進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western等實(shí)驗(yàn)，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進(jìn)行相應(yīng)濃縮。

9．沉淀即為細(xì)胞核，要吸盡殘余的上清（避免細(xì)胞漿蛋白的污染），加入50-100μl核蛋白抽提試劑。

10．用移液器吹打或高速渦旋15秒（可適當(dāng)延長(zhǎng)）至沉淀分開(kāi)，冰浴10分鐘。

11．最高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋10秒，4℃12000～16000g離心10分鐘。12．立即吸取上清至預(yù)冷的樣品管中，此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？蛇M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-70℃凍存。    對(duì)于組織樣品：    把組織稱(chēng)重后，盡可能切成非常細(xì)小的碎片，按每50mg組織加入200μl-500μl PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細(xì)胞懸液，500 g離心2～3分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，收集沉淀。加入200μl漿蛋白抽提試劑后接上述步驟5。

注意事項(xiàng)：

1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用Bradford法測(cè)定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白定量試劑盒(貨號(hào)PC0020)測(cè)定蛋白濃度。

2．對(duì)于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對(duì)凍存組織抽提效果較差。

3．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

備注：以上數(shù)據(jù)均來(lái)自公開(kāi)文獻(xiàn), Solarbio暫未進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。These protocols are for reference only. Solarbio does not independently validate these methods.

公司簡(jiǎn)介

上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷(xiāo)售生化試劑、實(shí)驗(yàn)耗材、自產(chǎn)分子生物學(xué)產(chǎn)品為一體，并能提供的專(zhuān)業(yè)性生物科技公司。公司秉承“以客戶(hù)為中心，以產(chǎn)品為保障、以誠(chéng)信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨"的發(fā)展理念，在依靠客戶(hù)的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長(zhǎng)。公司織結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)部管理科學(xué)，擁有一支既分工細(xì)致又高度合作的年輕化隊(duì)伍，保持了各個(gè)部門(mén)之間的高效合作運(yùn)轉(zhuǎn)，充分保障了公司在充滿(mǎn)競(jìng)爭(zhēng)的市場(chǎng)中處于地位。公司注重與*合作，目前已與 Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf等企業(yè)結(jié)成緊密的合作伙伴關(guān)系，代理其世界的*產(chǎn)品，并在全國(guó)各地設(shè)有分銷(xiāo)機(jī)構(gòu)。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶(hù)提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫(kù)存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格，所有這些都保證了我們向您提供的是專(zhuān)業(yè)的服務(wù)！立足北京，上海，*，隨著產(chǎn)品營(yíng)銷(xiāo)戰(zhàn)略的不斷延伸，我們將逐步發(fā)展成為*的專(zhuān)業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶(hù)一起，利用各自的資源優(yōu)勢(shì)和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神，為中國(guó)生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。為了更好、更全面的發(fā)展，現(xiàn)公司正在誠(chéng)招各地代商和招聘若干銷(xiāo)售、研發(fā)人員，歡迎垂詢(xún)并期待您的加入！

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