DNA含量（細(xì)胞周期）檢測試劑盒

詳細(xì)說明：

貨號：CA1510

產(chǎn)品名稱：DNA含量(細(xì)胞周期)檢測試劑盒

規(guī)格： 20T

保存：-20℃避光保存，一年有效。

產(chǎn)品特點：

細(xì)胞周期是指連續(xù)分裂細(xì)胞從一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂結(jié)束所經(jīng)歷的整個過程。在這個過程中，細(xì)胞遺傳物質(zhì)復(fù)制并加倍，且在分裂結(jié)束時平均分配到兩個子細(xì)胞中去。細(xì)胞周期又可以分為間期和有絲分裂期，細(xì)胞間期常劃分為休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整個周期可表示為G1→S→G2→M。DNA周期檢測可用來反應(yīng)細(xì)胞周期的各個期的狀況，即細(xì)胞增殖狀況。利用細(xì)胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料（如碘化丙啶PI）結(jié)合的特性，細(xì)胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細(xì)胞儀檢測的熒光強度也不一樣。

細(xì)胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮，核裂解，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對90°角光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信號均降低。因此可以通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化來觀察凋亡細(xì)胞。用PI對細(xì)胞進行染色，凋亡細(xì)胞由于總DNA量降低，于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)DNA低染細(xì)胞群，即G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）,即細(xì)胞凋亡群。

本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮、貼壁）的DNA含量（細(xì)胞周期）檢測。

使用方法：（僅供參考）

1， 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時設(shè)立陰性對照組，并收集細(xì)胞。

2， 用PBS洗滌細(xì)胞一次，1500rpm，5min離心收集，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL，取1mL單細(xì)胞懸液。

3， 制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，在細(xì)胞中加入70%預(yù)冷乙醇500μL固定2小時，4℃保存，染色前用PBS洗去固定液；如需要，細(xì)胞懸液可用200目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾一次。

4， 細(xì)胞沉淀中加100μL RNase A 溶液，重懸細(xì)胞，37℃水浴30min。

5， 再加入400μL PI染色液混勻，4℃避光孵育30min。

6， 上機檢測，記錄激發(fā)波長488nm處紅色熒光。

注意事項：

1. 碘化丙啶（PI）染色液保存和使用過程中應(yīng)注意避光。

2. PI有毒，操作時應(yīng)戴手套，并避免污染。

3. 熒光染料都存在淬滅問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

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