TNFα免疫組化染色試劑盒
更新時(shí)間:2010-01-04 | 點(diǎn)擊率:7037
系列SABC試劑盒使用說明書
TNFα免疫組化染色試劑盒
產(chǎn)品編號(hào):SA 2041
保存:4℃冷藏
有效期:一年
工作原理:
TNFα是腫瘤壞死因子α抗原,該蛋白和誘導(dǎo)細(xì)胞的快速死亡有關(guān)。
抗體:兔抗TNFα抗原,親和純化抗體。
適宜種屬:人、大鼠、小鼠組織。
標(biāo)本處理:細(xì)胞涂片,冰凍和石蠟切片。
染色模式:細(xì)胞漿。
試劑盒內(nèi)容:
1.5%BSA封閉液2ml或5ml,組織切片的封閉。
2.兔抗TNFα抗原2ml或5ml。
3.生物素化山羊抗兔IgG,2ml或5ml。
4.SABC,2ml或5ml。鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物。
5.陽性對(duì)照片1-2張。
用戶自備試劑:
1.APES或POLY-L-LYSINE(有售)。
2.PBS(Ph7.2-7.6)配法:1000ml蒸餾水中加氯化鈉9g,Na2HPO4.12H2O 6g,Na2HPO4.2H2O 0.4g。
3.DAB顯色試劑盒(有售)。
石蠟切片微波修復(fù)抗原染色程序:
1. 載玻片防脫片劑處理:可選擇APES或POLY-L-LYSINE。撈片后置烤箱60℃ 30-60分鐘以使切片緊密粘附。
2. 切片脫臘至水。
3. 30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。
4. 滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,不洗,
5. 滴加兔抗TNFα抗體,37℃ 1-2小時(shí)或4℃過夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分鐘3次。
6. 滴加生物素化山羊抗兔IgG,20-37℃ 20分鐘。PBS(pH7.2-7.6)洗2分鐘3次。
7. 滴加試劑SABC,20-37℃ 20分鐘。PBS(pH7.2-7.6)洗5分鐘4次。
8. DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒(AR1022)。取1ml蒸餾水,加試劑盒中A,B,C試劑各1滴,混勻后加至切片。室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般5-30分鐘。蒸餾水洗滌。
9. 蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
血涂片,培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片染色程序:
1. 載玻片經(jīng)防脫片劑處理(POLY-L-LYSINE)。
2. 抗凝血經(jīng)分層離心后涂片;培養(yǎng)細(xì)胞也可涂片或貼片生長(zhǎng);切片室溫風(fēng)扇吹干。
3. 固定方案4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定30分鐘;對(duì)不能耐受甲醛固定的抗原,純丙酮室溫固定30分鐘。蒸溜水洗。(干燥后可冰凍保存)。
4. 30%H202 1份+純甲醇50份混合,室溫浸泡30分鐘,以滅活內(nèi)源性過氧化酶。蒸餾水洗。
5. 其余步驟和石蠟切片4-9步相同。
結(jié)果:陽性細(xì)胞漿著色呈棕黃色。
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