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大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說(shuō)明書

更新時(shí)間:2012-07-26  |  點(diǎn)擊率:1947

 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿、或相關(guān)組織液中載脂蛋白A1(apo-A1)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)水平。用純化的大鼠
載脂蛋白A1(apo-A1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入載脂蛋白
A1(apo-A1),再與HRP 標(biāo)記的載脂蛋白A1(apo-A1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)
合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的載脂蛋白A1(apo-A1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)
儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)
的含量。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑6ml×1 瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品(1800 μg/ml) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說(shuō)明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個(gè)
標(biāo)本處理及要求
1.血清、血漿標(biāo)本可直接測(cè)定;
2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
3.采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn),若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反
復(fù)凍融。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上按序設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,在*、第二孔中分別
加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;再各取100μl 分
別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后,在第
三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉;再各取50μl 分別加到第五、第六孔中;再在第五、
第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加
到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、
第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,
混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為
1200 μg/ml ,800 μg/ml,400μg/ml,200μg/ml,100 μg/ml)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣
品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣
品終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔OD 值的),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)
算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 嚴(yán)格按說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.底物請(qǐng)避光保存。
檢測(cè)范圍:
50 μg/ml -1500 μg/ml
規(guī)格:
96 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月

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