雜交膜轉(zhuǎn)印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區(qū)別
雜交膜轉(zhuǎn)印膜*纖維素膜NC膜與PVDF膜的區(qū)別
1. *纖維素膜
*纖維素膜是蛋白印跡廣泛使用的轉(zhuǎn)移介質(zhì)，對蛋白有很強(qiáng)的結(jié)合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學(xué)發(fā)光(Luminol類)、常規(guī)顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高。NC膜的使用也很簡便，比如不需要甲醛預(yù)處理，只要在無離子水面浸潤排出膜內(nèi)氣泡，再在電泳緩沖液中平衡幾分鐘就可以了；比如NC膜很容易封閉，也不需要特別嚴(yán)謹(jǐn)?shù)那逑礂l件。轉(zhuǎn)移到NC膜上的蛋白在合適的條件下可以穩(wěn)定保存很長時間，不過要注意的是純的硝纖膜在比較脆，又容易卷，操作要小心，不適合用于需要多次重復(fù)清洗的用途--因?yàn)榻?jīng)不起多次“折磨”。選擇硝纖膜時要注意的是選擇合適的孔徑，通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔徑的膜，小于20KD的話建議選擇0.2um的，如果小于7KD的話好選擇0.1um的膜。另外還要注意選擇純的NC膜--混有含醋酸纖維(CM)的NC膜結(jié)合力會有所降低。另外提醒一句：由于NC膜上結(jié)合的蛋白會因?yàn)橐恍┤ノ蹌┒淮妫虼嗽诜忾]時好使用較溫和的Tween20，而且濃度不要超過0.3%(據(jù)說0.05%效果好)。一般而言，NC膜越純，其蛋白結(jié)合能力就越高，所以要增加WB的靈敏度和分辨率，提高所使用膜的純度是個可以考慮的選擇。如果NC膜攙雜一些醋化纖維素--這在前面已經(jīng)提到，會影響蛋白質(zhì)結(jié)合。Protran由于是純NC膜，比較脆，機(jī)械耐受力欠佳，需要小心操作，如果擔(dān)心自己“粗手粗腳”，那么就可以考慮一下Optitran或者Pall公司的以耐受力著稱的BioTrace NT Nitrocellulose Transfer Membrane。卷膜肯定是實(shí)惠的選擇，只不過要自己動手裁剪--切記，必須帶手套操作。
*纖維素膜生產(chǎn)商：
GE WHATMAN BA83 BA85 價格 1950.00/卷 有現(xiàn)貨
WHATMAN轉(zhuǎn)印跡膜轉(zhuǎn)印膜10401396 10401196WHATMAN*纖維素膜(NC膜)轉(zhuǎn)印跡膜轉(zhuǎn)印膜10401396 10401196其它的*纖維素雜交膜可能含有大量的醋酸纖維素，這會降低蛋白的結(jié)合能力。Protran雜交膜采用純*纖維素制成，具有好的操作強(qiáng)度，兼容多種檢測方法，包括同位素法，化學(xué)發(fā)光法(以luminol為基礎(chǔ))，比色法和熒光法等。與PVDF膜相比，Protran*纖維素膜在使用中不需要甲醇預(yù)濕步驟，這使它可以用于那些需要親水性環(huán)境的蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移，在轉(zhuǎn)移之前，膜僅需要在水中簡單潤濕，然后置于轉(zhuǎn)移緩沖液中，而不再需要其它預(yù)濕步驟。
高結(jié)合力，低背景
除了具有高結(jié)合能力以外，Protran*纖維素膜本身產(chǎn)生的背景非常低，膜*的表面性質(zhì)保證了優(yōu)異的信噪比，而同時卻不需要嚴(yán)格的清洗條件。
小分子蛋白的高保留率
Protran*纖維素膜有多種孔徑大小可供選擇，使不同的應(yīng)用都可以獲得佳的效果。0.2μm孔徑的Protran BA83*纖維素膜通過減少小分子“下漏”來保留分子量小于20KD的蛋白質(zhì)分子。0.45μm孔徑的Protran BA85*纖維素膜是較大分子量樣品和常規(guī)核酸研究的理想選擇。0.1μm孔徑的Protran BA79則用于分子量低于7kD的小分子蛋白轉(zhuǎn)移。
Protran*纖維素膜的一個主要優(yōu)勢在于，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，結(jié)合在Protran膜上的蛋白能夠保持分子識別活性長達(dá)5年。
Protran雜交三明治組合
由1張預(yù)切的*纖維素膜和2張3MM層析雜交紙組成的三明治包裝，幫您節(jié)省更多的時間。這些膜都是用于雜交的質(zhì)量好的NC膜——Protran BA83或者BA85。
Protran *纖維素膜的結(jié)合能力為80~150µg/cm2，可高壓滅菌(液體冷循環(huán))
GE RPN303C
PALL 66485 常用的NC膜 30cm*3m/卷超低*：1250.00/卷現(xiàn)貨
2. PVDF膜
與*纖維素膜相比，PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力，機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都更*的性能。市售*纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2(而結(jié)合強(qiáng)度PVDF比硝纖膜強(qiáng)6倍！)。但是PVDF膜大的優(yōu)點(diǎn)不僅于此：更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇；而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的，特別是需要做N端蛋白測序，在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下，當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇。但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡，才能用，而且適用過程中萬一干了也要同樣程序再處理(不過要真出現(xiàn)這種問題也是自己欠扁，誰要你不小心呢，轉(zhuǎn)膜前處理也就罷了，轉(zhuǎn)膜后再這樣處理可能會影響后繼的抗體識別呢)。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的，后者孔徑小，對小分子蛋白有較好的攔截吸附，背景可能會比前者稍高。
pvdf膜生產(chǎn)商：
MILLIPORE * 常年 現(xiàn)貨
IPVH00010 0.45um 1650.00/卷
ISEQ00010 0.22um 2050.00/卷
PALL 66543 2150.00/卷
卷膜經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，裁剪剩下的邊角料還可以用來做點(diǎn)雜交。再次強(qiáng)調(diào)的是，疏水PVDF膜在用前必須經(jīng)過50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘，待膜變成半透明后用純水漂洗一下，轉(zhuǎn)入電泳緩沖液平衡才能用
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