結(jié)合態(tài)淀粉合成酶 (GBSS)試劑盒 說(shuō)明 技術(shù)文章
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結(jié)合態(tài)淀粉合成酶 (Granule-Bound Starch Synthase,GBSS)試劑盒
商品貨號(hào):QS3405
英文名稱:Granule-bound starch synthase Assay Kit
別名:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶試劑盒 GBSS Kit 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)試劑盒
檢測(cè)方法:常量法
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
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QS3405-25管/24樣 | 索橋生物 | 25管/24樣 | ¥2000.00元 | |
QS3405-50管/48樣 | 索橋生物 | 50管/48樣 | ¥3200.00元 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
測(cè)定意義:
GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
測(cè)定原理:
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時(shí)生成ADP;進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過(guò)340nm下測(cè)定NADPH的增加量,可以計(jì)算GBSS活性。
產(chǎn)品說(shuō)明書
貨號(hào):QS3405-50 規(guī)格:50 管/48 樣
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶 (Granule-bound starch synthase,GBSS)試劑盒說(shuō)明書
紫外分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈 淀粉的合成。
測(cè)定原理:
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時(shí)生成ADP; 進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化 NADP+還 原為 NADPH,其中 NADPH 生成量與前一步反應(yīng)生成的 ADP 數(shù)量呈正比,通過(guò) 340nm 下測(cè)定 NADPH 的增加量,可以計(jì)算 GBSS 活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 60mL×2 瓶,4℃保存;
液體一:7mL×2 瓶,4℃保存;
液體二:4mL×2 瓶,4℃保存;
液體三:8mL×2 瓶,4℃保存;
粉劑一:2 支,4℃保存;
粉劑二:2 支,4℃保存;
粉劑三:2 支,-20℃保存;
粉劑四:2 支,4℃保存;
粉劑五:2 支,4℃保存;
粉劑六:2 支,-20℃保存;
粉劑七:2 支,-20℃保存;
粉劑八:2 支,4℃保存;
粉劑九:2 支,4℃保存;
粉劑十:2 支,-20℃保存;
試劑一:液體×1 支,-20℃保存;臨用前加入 500μ L 蒸餾水,充分溶解備用;用不完的 試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加入 500μ L 蒸餾水,充分溶解備用;用不完的 試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
反應(yīng)液Ⅰ的配制:臨用前取液體一、粉劑一、粉劑二和粉劑三各一支,依次把粉劑一、粉 劑二和粉劑三轉(zhuǎn)移到液體一中混合溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
反應(yīng)液Ⅱ的配制:臨用前取液體二、粉劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七各一支,依次把粉 劑四、粉劑五、粉劑六和粉劑七轉(zhuǎn)移到液體二中混合溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存, 禁止反復(fù)凍融。
反應(yīng)液Ⅲ的配制:臨用前取液體三、粉劑八、粉劑九和粉劑十各一支,依次把粉劑八、粉 劑九和粉劑十轉(zhuǎn)移到液體三中混合溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
粗酶液制備:
稱取 0.1~0.2g 組織(建議稱取約 0.1g 組織),加入 1mL 提取液,冰浴中勻漿。10000g , 4℃離心 10min,棄上清,在沉淀中加入 1mL 提取液充分混勻,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、在 EP 管中按順序加入下列試劑
試劑名稱(μ L) | 測(cè)定管 |
樣本 | 150 |
反應(yīng)液Ⅰ | 270 |
混勻,30℃保溫 20 min,置沸水浴中 1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻 | |
反應(yīng)液Ⅱ | 150 |
混勻,30℃保溫 30 min,置沸水浴中 1 min(蓋緊,防止水分散失), 冰浴冷卻,10000g 25℃離心 10min,取上清液 | |
上清液 | 450 |
反應(yīng)液Ⅲ | 300 |
試劑一 | 10 |
試劑二 | 10 |
混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2,計(jì)算 Δ A=A2-A1。
注意:反應(yīng)液Ⅰ如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混勻。
GBSS 活性計(jì)算:
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。 GBSS(nmol/min/mg prot)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T×稀釋倍數(shù) =522×Δ A÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
GBSS 活性(nmol/min/g 鮮重)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T× 稀釋倍數(shù)=522×Δ A÷W
V 反總:反應(yīng)體系總體積,5.7×10-4 L;ε :NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm; d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.15 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T: 反應(yīng)時(shí)間,2 min;稀釋倍數(shù):1.71;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量。
淀粉系列 | 單價(jià) | |||
QS3400 | 淀粉含量測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 260 |
MS3400 | 淀粉含量測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 500 |
QS3401 | α-淀粉酶測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 250 |
MS3401 | α-淀粉酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 480 |
QS3402 | β-淀粉酶測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 460 |
MS3402 | β-淀粉酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 900 |
QS3403-50 | ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 2300 |
QS3403-25 | ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1600 |
MS3403 | ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 4400 |
QS3404-50 | 可溶性淀粉合成酶(SSS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS3404-25 | 可溶性淀粉合成酶(SSS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS3404 | 可溶性淀粉合成酶(SSS)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 6000 |
QS3405-50 | 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS3405-25 | 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS3405 | 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 6000 |
QS3406 | 淀粉分支酶(SBE)測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 850 |
MS3406 | 淀粉分支酶(SBE)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1600 |