植物α-淀粉酶（α-Amylase，α-AL）試劑盒 說明 技術(shù)文章

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植物α-淀粉酶（α-Amylase，α-AL）試劑盒

商品貨號：QS3401
英文名稱：α-amylase Assay Kit
別名：植物α-淀粉酶（α-AL）活性檢測試劑盒
檢測方法：常量法

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。

測定原理：

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱，在70℃鈍化15min，從而測定α-淀粉酶活性。

產(chǎn)品說明書

貨號：QS3401                規(guī)格：50 管/24 樣

植物 α-淀粉酶（α-amylase，α-AL）試劑盒說明書 可見分光光度法

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，包括 α -淀粉酶和 β -淀粉酶。α -淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作 用于淀粉中的 α -1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉 的粘度降低，因此又稱為液化酶。

測定原理：

還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β -淀粉酶不耐熱，在 70℃鈍化 15min， 從而測定 α -淀粉酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：25mL×1 瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需 90℃加熱溶解后再用；

試劑二：20mL×1 瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加熱溶解后再用。

粗酶液提?。?/strong>

組織：稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加 1 mL 蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離 心管中，在室溫下放置提取 15min，每隔 5min 振蕩 1 次，使其充分提??；3000g，25℃離心 10min， 吸取上清液并且加蒸餾水定容至 10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。

血清（漿）：直接檢測。

操作步驟和加樣表（在 1.5mLEP 管中依次加入下列試劑）：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 試劑一或試劑二 40℃預(yù)熱 10min

3、測定步驟 

   混勻，95℃水浴 5min，冷卻， 540nm 處讀取對照管和測定管吸光度，計(jì)算 Δ A=A 測定管-A 對照管。

α-淀粉酶活性計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為 y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α -淀粉酶活性

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活力單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/g 鮮重)=[(Δ A＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣 總)÷T=1.075×(Δ A＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(Δ A＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr） ÷T=0.1075×(Δ A＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（漿）樣本中 α -淀粉酶活性計(jì)算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個(gè)酶活性單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(Δ A＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(Δ A＋ 0.1778)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提取 液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min。