植物 β-淀粉酶（β-Amylase，β-AL）試劑盒 說明 技術(shù)文章

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植物 Β-淀粉酶（Β-Amylase，Β-AL）試劑盒

商品貨號：QS3402
英文名稱：β-amylase Assay Kit
別名：植物β-淀粉酶（β-AL）活性檢測試劑盒
檢測方法：常量法

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

測定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。

測定原理：

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐熱。根據(jù)上述特性，鈍化其中之一，就可測出另一種淀粉酶的活力。

產(chǎn)品說明書

貨號：QS3402                規(guī)格：50 管/24 樣

  植物 β -淀粉酶（β -amylase，β -AL）試劑盒說明書

        可見分光光度法

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉，主要包括 α -淀粉酶和 β -淀粉酶。β -淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機(jī) 地作用于淀粉中的 α -1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。

測定原理：

還原糖還原 3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。α -淀粉酶不耐酸，β -淀粉酶不耐熱。 根據(jù)上述特性，鈍化其中之一，就可測出另一種淀粉酶的活力。

自備實驗用品和儀器：

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：50mL×1 瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需 90℃加熱溶解后再用；

試劑二：40mL×1 瓶，4℃保存，若有沉淀析出，需 70℃加熱后再用。

粗酶液提?。?/strong>

組織：稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加入 1mL 蒸餾水，研磨勻漿；將勻 漿倒入離心管中，提取液在室溫下放置提取 15min，每 5min 振蕩 1 次，使其充分提??；3000g， 25℃離心 10min，取上清液加蒸餾水定容至 10 mL，搖勻，即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液 1mL，加入 4mL 蒸餾水，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于（α ＋β ） 淀粉酶總活力的測定。

血清（漿）等液體樣本：（1）直接檢測 α -淀粉酶。（2）吸取淀粉酶原液 1mL，加入 4mL 蒸餾水，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于（α ＋β ）淀粉酶總活力的測定。

測定步驟：

1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 試劑一和試劑二 40℃預(yù)熱 10min。

3、測定操作表：

混勻，95℃水浴 5min，冷卻，在 540nm 下測定吸光度，從左到右分別記為 A1、A2、A3 和 A4。

酶活性計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸曲線為 y=3.7215x -0.1778； x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α -淀粉酶活性

（1）按照樣本質(zhì)量計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T =1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T =0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（漿）等液體樣本中 α -淀粉酶活性計算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α -淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T=0.1075×(A2-A1 ＋0.1778)

3、總淀粉酶活性計算

（1）按照樣品質(zhì)量計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

總淀粉酶活性(mg/min//g 鮮重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣 總)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T =0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（漿）等液體樣本中總淀粉酶活性計算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

總淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T =0.5375×(A4-A3＋0.1778)

4、β -淀粉酶活性計算

（1）按照樣本質(zhì)量計算

單位定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

β - 淀粉酶活性 (mg/min/g 鮮 重 )= 淀 粉 酶 總 活 性 -α - 淀粉酶活性 =[5.375×(A4-A3 ＋ 0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

β -淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=淀粉酶總活性-α -淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋ 0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

（3）血清（漿）等液體樣本中 β -淀粉酶活性計算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

β - 淀 粉 酶 活 性 （ mg/min/mL ） = 淀 粉 酶 總 活 性 -α - 淀 粉 酶 活 性 =0.5375×(A4-A3 ＋ 0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)

5：總淀粉酶稀釋倍數(shù)；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提取液總體積，10 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； T：反應(yīng)時間，5min。