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酸性磷酸酶(ACP) 活性測定試劑盒 說明 技術(shù)文章

更新時間:2019-06-10  |  點擊率:3421
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酸性磷酸酶(Acid Phosphatase ,ACP) 活性測定試劑盒

商品貨號:QS2001
英文名稱:Tissue and Blood Acid Phosphatase(ACP)Assay Kit
別名:組織及血液酸性磷酸酶試劑盒 ACP Kit 組織及血液酸性磷酸酶(ACP)試劑盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
QS2001-50管/24樣索橋生物50管/24樣¥160.00元 

 

  • 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
  •  
  • 產(chǎn)品說明書

 

測定意義:                           

ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸,常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理:

在酸性環(huán)境中,ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚,苯酚與4-氨基安替和六氰合鐵酸鉀反應(yīng)生成紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過測定510nm吸光度增加速率,來計算ACP活性。

貨號: QS2001              規(guī)格:50管/24樣

 

酸性磷酸酶(acid phosphatase ,ACP) 活性測定試劑盒說明書

       可見分光光度法

 

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

ACP 在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸,常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP 常用 于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理:

在酸性環(huán)境中,ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚,苯酚與 4-氨基安替和六氰合鐵酸鉀反應(yīng)生 成紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510nm 吸光度增加速率,來計算 ACP 活 性。

自備實驗用品及儀器:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1 瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體×1 瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體×1 瓶,4℃避光保存,變成藍(lán)綠色不能使用。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1 支,2μ mol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

粗酶液提?。?/strong>

1. 組織:

按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,4℃、8000g 離心 10min,取上清液待測。

2. 細(xì)菌或細(xì)胞:

按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建 議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒, 總時間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定,或者適當(dāng)稀釋后測定。

測定:

1.分光光度計預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 510 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于 37 o C 水浴中預(yù)熱 30 min。

3. 空白管:取 EP 管,加入 20μ L 蒸餾水,200μ L 試劑二,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取 EP 管,加入 20μ L 標(biāo)準(zhǔn)品,200μ L 試劑二,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 對照管:取 EP 管,加入 20μ L 上清液,200μ L 蒸餾水,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 測定管。

6. 測定管:取 EP 管,加入 20μ L 上清液,200μ L 試劑二,200μ L 試劑三,混勻后置于 37℃ 水浴中保溫 15min;加入試劑四 600μ L,混勻后于 510 nm 測定吸光度,記為 A 測定管。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做一次。每個測定管設(shè)一個對照管。

ACP 活性計算:

1. 血液中 ACP 活性計算

活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力(μ mol/min/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總] ÷V 樣÷T = 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 ACP 活性計算

(1)按照蛋白濃度計算 活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP(μ mol/min/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總] ÷(Cpr×V 樣)÷T =6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算 活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP (μ mol/min/g 鮮重)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T = 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W

(3)按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義:37℃中每 104個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 酚定義為 1 個酶活單位。

ACP (μ mol/min/104 cell)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總] ÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T = 6.8×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

C 標(biāo)準(zhǔn)品:2μ mol/mL;V 反總:反應(yīng)體系總體積(mL),1020μ L=1.02 mL; V 樣:加入反應(yīng) 體系中上清液體積(mL),0.020mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間(min),15 min。

注意事項:

1、試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。

2、試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。

3、加入試劑四后必須立即混勻,否則顯色不*。

4、ACP 不穩(wěn)定,尤其在 37℃和 pH 大于 7 的條件下活力喪失快,因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng) 天準(zhǔn)備;血清樣品中,每毫升血清中加入 10mg 檸檬酸氫二鈉或者 5mg 硫酸氫鈉,使 pH 降 至 6.5 以下,或 5ml 血清加入 30%醋酸溶液 2~3 滴,置于 4℃可保存 1 周。

 

系列產(chǎn)品及單價

酯酶系列    
QS2000乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒可見分光光度法50管/48樣200
MS2000乙酰膽堿酯酶(AchE)測試盒微量法100管/96樣380
QS2001組織及血液酸性磷酸酶(ACP)測試盒可見分光光度法50管/24樣160
MS2001酸性磷酸酶(ACP)測試盒微量法100管/48樣310
QS2002組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒可見分光光度法50管/24樣160
MS2002堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒微量法100管/48樣310
QS2003羧酸酯酶(CarE)測試盒可見分光光度法50管/48樣300
MS2003羧酸酯酶(CarE)測試盒微量法100管/96樣590

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