NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒 說(shuō)明 技術(shù)文章
NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒
商品貨號(hào):QS1003
英文名稱(chēng):NADP-Malate Dehydrogenase(NAD-MDH)Assay Kit
別名:NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶試劑盒 NADP-MDH Kit NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒 NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒
檢測(cè)方法:常量法
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
QS1003-50管/48樣 | 50管/48樣 | ¥320.00元 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
測(cè)定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線(xiàn)粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線(xiàn)粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴(lài)的MDH和NADP-依賴(lài)的MDH, NADP-MDH主要存在于真核細(xì)胞中。
測(cè)定原理:
NADP-MDH催化NADPH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
貨號(hào): QS1003 規(guī)格:50 管/48 樣
NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)試劑盒說(shuō)明書(shū) 紫外分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線(xiàn)粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。 草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中 扮演著重要的角色,包括線(xiàn)粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病 性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH 分為 NAD-依賴(lài)的 MDH 和 NADP-依賴(lài)的 MDH, NADP-MDH 主 要存在于真核細(xì)胞中。
測(cè)定原理:
NADP-MDH 催化 NADPH 還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一: 提取液 60 mL×1 瓶,在 4℃保存;
試劑二: 液體 50 mL×1 瓶,在 4℃保存;
試劑三: 粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μ L 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃ 保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四: 粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μ L 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃ 保存,禁止反復(fù)凍融。
樣本測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一),超 聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃ 離心 10min,取上清置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織, 加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。
3、操作表:
試劑名稱(chēng)(μ L) | 測(cè)定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中,混勻后立即在 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2,計(jì)算 Δ A=A1-A2。
注意:若 A1-A2 大于 0.5,需將樣本用提取液稀釋?zhuān)?A1-A2 小于 0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。 計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NADP-MDH 活力單位的計(jì)算:
1、血清(漿)NADP-MDH 活力的計(jì)算
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷V 樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-MDH 活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH ( nmol/min/mg prot ) =[ΔA×V 反 總 ÷ ( ε ×d ) ×109 ]÷(V 樣 ×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T =6430×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε ×d)×109 ]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=12.86×ΔA
V 反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d: 比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.02 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng) 時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。
系列產(chǎn)品及單價(jià)
輔酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
QS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
MS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
QS1002 | NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1002 | NAD-蘋(píng)果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1003 | NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1003 | NADP-蘋(píng)果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS1005 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
MS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
QS1011 | 線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
MS1011 | 線(xiàn)粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |
- 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)