谷胺酰胺合成酶（GS）試劑盒 說明書 技術(shù)文章

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谷氨酰胺合成酶（Glutamine Synthetase，GS）活性檢測試劑盒

商品貨號：MS1807
英文名稱：Micro Glutamine Synthetase（GS）Assay Kit
別名：谷氨酰胺合成酶試劑盒 GS Kit 谷氨酰胺合成酶（GS)試劑盒 谷氨酰胺合成酶（GS)測試盒
檢測方法：微量法

• 產(chǎn)品詳細介紹

測定意義：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。

測定原理：

GS在ATP和Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨酰基異羥肟酸，在酸性條件下與鐵形成的絡(luò)合物在540nm處有大吸收峰，可用分光光度計測定。

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• 產(chǎn)品說明書

貨號: QS1807                                             規(guī)格：50管/24樣

谷胺酰胺合成酶（Glutamine synthetase，GS）試劑盒說明書 可見分光光度法

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一，催化銨離子和谷 氨酸合成谷氨酰胺，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲 存和運輸形式。

測定原理：

GS 在 ATP 和 Mg2+存在下，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺進一步轉(zhuǎn)化為 γ ─ 谷氨?；惲u肟酸，在酸性條件下與鐵形成紅色的絡(luò)合物；該絡(luò)合物在 540nm 處有大吸收峰， 可用分光光度計測定。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和 蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：10mL×1 瓶，-20℃保存。

試劑二：10mL×1 瓶，-20℃保存。

試劑三：粉劑×2 瓶，-20℃保存。用時每瓶加入 5mL 蒸餾水充分溶解備用，用不完的試 劑仍-20℃保                                                   存。

試劑四：10mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣本測定的準(zhǔn)備：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超 聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃ 離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在 EP 管中加入下列試劑：

試劑名稱（μ L）   測定管         對照管

試劑一         320

試劑二                       320

試劑三         140            140

樣本          140            140

       混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴 30min

試劑四         200            200

混勻，靜置 10min 后，5000g，25℃離心 10min，取上清液測定 540nm 處的吸光值 A。△A=A 測 定管-A 對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。 

GS 活力單位的計算：

1、血清（漿）GS 活性 單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 540 下吸光值變化 0.01 定義為一個 酶活力單位。

計算公式：

GS（U/mL）=Δ A×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =19×Δ A

2、組織、細菌或細胞 GS 活性

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義為一 個酶活力單位。

GS（U/mg prot）＝Δ A×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷0.01÷T =19×Δ A÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義為一個酶 活力單位。

GS（U/g 鮮重）＝Δ A×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =19×Δ A÷W

（3）按細菌或細胞密度計算 單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 540nm 下吸光值變化 0.01 定義 為一個酶活力單位。

GS（U/10^4 cell）＝Δ A×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =0.038×Δ A

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.8mL； V 樣：加入樣本體積，0.14mL；V 樣總：加入提取液體積， 1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或 細胞總數(shù)，500 萬。

系列產(chǎn)品及單價