苯丙氨酸解氨酶試劑盒說明書 技術文章
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苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine Ammonialyase,PAL)活性檢測試劑盒
商品貨號:MS1604
英文名稱:Micro Phenylalanine Ammonia-lyase (PAL) Assay Kit
別名:苯丙氨酸解氨酶試劑盒 PAL Kit 苯丙氨酸解氨酶(PAL)試劑盒 苯丙氨酸解氨酶(PAL)測試盒
檢測方法:微量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
MS1604 -100管/96樣 | 索橋生物 | 100管/96樣 | ¥1000.00元 |
- 產品詳細介紹
測定意義:
PAL(EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數微生物中,是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶,與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關,在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。
測定原理:
PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm處有大吸收值,通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
- 產品說明書
貨號:MS1604 規(guī)格:100 管/96 樣
苯丙氨酸解氨酶(Phenylalnine ammonialyase,PAL)試劑盒說明書
微量法
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
PAL(EC4. 3 1 5)廣泛存在于各種植物和少數微生物中,是植物體內苯丙烷類代謝的關 鍵酶,與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關,在植 物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。
測定原理:
PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm 處有大吸收值,通過 測定吸光值升高速率計算 PAL 活性。
自備實驗用品及儀器:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔 板(UV 板)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 15mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃ 保存;
試劑三:液體 1mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/strong>
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節(jié)波長至 290nm,蒸餾水調零。
2、準備 96 孔 UV 板一塊(非普通酶標板,普通酶標板只能透過可見光,不能透過紫外光,檢 測波長小于 340nm 務必使用 UV 板)。
3、在 EP 管或 96 孔 UV 板中按順序加入下列試劑
試劑名稱(μ L) 測定管 對照管
樣本 5
試劑一 145 150
試劑二 40 40
混勻,30℃ 準確反應 30min
試劑三 10 10
混勻,靜置 10min 后, 290nm 處記錄測定管吸光值 A1 和對照管吸光值 A2,△A=A1-A2。 注意:對照管只要做一管
PAL 活性計算:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1) 按蛋白濃度計算
單位定義:每 mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個酶活性 單位。
PAL(U/mg prot)=Δ A×V 反總÷(Cpr× V 樣)÷0.1÷T =13.3×Δ A÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位定義:每 g 組織在每 mL 反應體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個酶活性單位。
PAL(U/g 鮮重)=Δ A×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =13.3×Δ A÷W
V 反總:反應體系總體積,0.2mL; V 樣:加入樣本體積,0.005mL;V 樣總:加入提取液體積, 1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
用 96 孔板測定的計算公式如下
(1) 按蛋白濃度計算 單位定義:每 mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.05 為一個酶活 性單位。
PAL(U/mg prot)=Δ A×V 反總÷(V 樣×Cpr)÷0.05÷T =26.6×Δ A÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位定義:每 g 組織在每 mL 反應體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.05 為一個酶活性單位。
PAL(U/g 鮮重)=Δ A×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.05÷T =26.6×Δ A÷W
V 反總:反應體系總體積,0.2mL; V 樣:加入樣本體積,0.005mL;V 樣總:加入提取液體積, 1 mL;T:反應時間,30 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
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