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丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術(shù) 文章

更新時間:2019-04-03  |  點擊率:2208

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丙酮酸脫羧酶( Pyruvate Decarboxylase,PDC ) 活性測定試劑盒

商品貨號:QS1006
英文名稱:Pyruvate Decarboxylase (PDC) Assay Kit
別名:丙酮酸脫羧酶試劑盒 PDC Kit 丙酮酸脫羧酶(PDC)試劑盒 丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒
檢測方法:常量法

 

商品貨號:商品品牌:規(guī)格基本售價選擇規(guī)格
QS1006-50管/48樣 50管/48樣¥720.00元 

測定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

 

貨號: QS1006                                                      規(guī)格:50管/48樣丙酮酸脫羧酶( pyruvate decarboxylase,PDC )

活性測定試劑盒說明書

紫外分光光度法

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

測定原理:

PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+;NADH在340 nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340 nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

自備實驗用品及儀器:

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體36mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1支,﹣20℃保存。

試劑五:液體60μL×1支,﹣20℃保存。

混合試劑:臨用前配制,將試劑四和試劑五轉(zhuǎn)移至試劑三中充分溶解待用,用不完的試劑

          分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑六:液體5mL×1瓶,4℃保存。

粗酶液提取:

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,工作3s,間歇10s,工作35次),16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

2、組織處理:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,16000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)等液體樣品:直接檢測。

PDC測定操作:

1. 分光光度計預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、100μL混合試劑、700μL試劑二和100μL試劑六,迅速混勻后于340nm比色,記錄15s和75s的吸光值,分別記為A1和A2。

4. 測定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、100μL混合試劑、700μL試劑二和100μL試劑六,迅速混勻后于340nm比色,記錄15s和75s的吸光值,分別記為A3和A4。

注意:空白管只需測定一次。

PDC活性計算公式:

(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/mg prot) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V總×106}÷(Cpr×V樣) ÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:25℃中,每克組織每分鐘催化1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min /g鮮重) =÷(W×V樣÷V樣總) ÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中,每104個細(xì)胞每分鐘催化1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。

PDC (μmol/min/104cell) ={[(A3-A4)-(A1-A2)]÷ε÷d×V總×106}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按血清(漿)體積計算

活性單位定義:25℃中,每毫升血清(漿)每分鐘催化1μmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (μmol/min /mL) =÷V樣÷÷T

=1.61×[(A3-A4)-(A1-A2)]

ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V總:反應(yīng)體系總體積,1mL=0.001 L,V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.1mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒;W:樣本質(zhì)量,g ;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,1 min。

 

輔酶Ⅰ系列    
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MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法100管/48樣330
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MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法100管/96樣550
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