NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 微量酶標(biāo)儀法 說(shuō)明 技術(shù) 文章
NADH 氧化酶(NADH Oxidase,NOX)活性檢測(cè)試劑盒
商品貨號(hào):MS1004
英文名稱:Micro NADH Oxidase(NOX) Assay Kit
別名:NADH氧化酶試劑盒 NOX Kit NADH氧化酶(NOX)試劑盒 NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒
檢測(cè)方法:微量法
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
MS1004-100管/96樣 | 索橋生物 | 100管/96樣 | ¥850.00元 |
測(cè)定意義:
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP,在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
貨號(hào):MS1004 規(guī)格:100管/96樣
NADH 氧化酶(NADH oxidase,NOX)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP,在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:液體20mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體1.5mL×1瓶,-20℃保存;
試劑四:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入5mL蒸餾水,用不完的試劑分裝后-20℃保
存,禁止反復(fù)凍融。
樣本的前處理:
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
- 準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 將勻漿600g,4℃離心5min。
- 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11100g,4℃離心10min。
- 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的NOX(此步可選做)。
- 步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于NOX活性測(cè)定。
血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟:
- 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至600nm,蒸餾水調(diào)零。
- 樣本測(cè)定
(1)試劑四于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五,混勻,記錄600nm處20s時(shí)吸光值A(chǔ)1和 1min20s后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A1-A2。
NOX活力單位的計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清(漿)NOX活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=2500×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.01定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.25mL; V樣:加入樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn)。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下:
1、血清(漿)NOX活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T=5000×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.005定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T=2.02×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.25mL; V樣:加入樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn)。
輔酶Ⅰ系列 | ||||
QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
QS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
MS1001 | 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1004 | NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
MS1004 | NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
MS1005 | 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
QS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
MS1006 | 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
MS1007 | 醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
QS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
MS1009 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
QS1010 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
MS1010 | NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
QS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
MS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |