乳酸脫氫酶（LDH）測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術(shù) 文章

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乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒

商品貨號：QS1001
英文名稱：Lacate Dehydrogenase（LDH）Assay Kit
別名：乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒
檢測方法：常量法

• 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
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• 產(chǎn)品說明書

測定意義：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

貨號：QS1001                                                     規(guī)格：50管/24樣

乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說明書

分光光度法

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD⁺/NADH之間互變。

測定原理：

LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；

試劑一：液體15 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用，配好后-20 ℃保存，可保存兩周，禁止反復(fù)凍融；

試劑三：液體15 mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體50 mL×1瓶，4℃保存；

操作步驟：

一、樣品測定的準(zhǔn)備：  

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500-1000:1 的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1:5-10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3. 血清（漿）樣品：直接檢測。

二、測定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min

充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min

充分混勻，室溫靜置3min，450 nm下測定吸光度，計(jì)算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。

LDH活力單位計(jì)算：

1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸曲線， y = 0.725x (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，μmol/mL；y為對吸光度)。
2. 血清（漿）LDH活力的計(jì)算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10³=92×ΔA

1. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計(jì)算

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10³ =92×ΔA÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

1. 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/g鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10³ =92×ΔA÷W

1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/10⁴ cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10³ =0.184×ΔA÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本的體積，0.05 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應(yīng)時間，15 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g; 500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。