內(nèi)毒素清除劑 使用說明
更新時(shí)間：2010-10-24 | 點(diǎn)擊率：6209
內(nèi)毒素清除劑
| 目錄號(hào) | 包裝 | 價(jià)格 | 產(chǎn)地 |
| | 50ml | 元 | Solarbio |
| | 100ml | 元 | Solarbio |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本公司生產(chǎn)的內(nèi)毒素清除劑主要用于清除DNA、蛋白質(zhì)或其他液體樣品中的內(nèi)毒素。在特定的pH值、鹽濃度和溫度條件下，內(nèi)毒素清除劑能與DNA、重組蛋白以及液體樣品中的內(nèi)毒素特異性結(jié)合，經(jīng)過室溫高速離心后，DNA或蛋白質(zhì)等保留在水相，而內(nèi)毒素則被濃縮到極小體積的下層相而被清除。經(jīng)過3次以上重復(fù)抽提后可將活性為5000～50000 EU/ml的內(nèi)毒素水平降低到5～0.5 EU/ml以下，即降低1000～10000倍。本試劑4℃可儲(chǔ)存半年，-20℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
操作步驟：
提取前請(qǐng)將內(nèi)毒素清除劑放在冰上冰浴5min，期間翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次使試劑均勻預(yù)冷。
1、a）已純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素清除：吸取500μl DNA溶液于微型離心管，加入1/10體積3M NaAc pH5.2或1/20體積5M NaCl溶液，冰浴5min。
b）在提取質(zhì)粒DNA過程中清除內(nèi)毒素：以堿裂解法提取質(zhì)粒為例，在加入裂解液和中和液并離心去除碎片之后，吸取含質(zhì)粒DNA的上清于新離心管中，冰浴5min。
2、加入1/5體積預(yù)冷的內(nèi)毒素清除劑，振蕩混勻，溶液變渾濁。
3、冰浴5min，溶液應(yīng)變清亮。
4、37℃水浴5min，不時(shí)振蕩，溶液又變渾濁。
5、12000rpm室溫離心5min，溶液應(yīng)分為兩相，上層水相含DNA，下層油狀相含內(nèi)毒素。
6、將含DNA的上層水相轉(zhuǎn)移到新管，棄油狀相，重復(fù)抽提三次，即重復(fù)步驟2-6三次。
7、加入2.5體積無水乙醇，-20℃沉淀30min或過夜；12000rpm離心10min，棄上清；70％乙醇洗滌沉淀，12000rpm離心5min棄上清；空氣干燥沉淀，加入100～200μl無內(nèi)毒素的高純水或TE溶解沉淀。
8、用內(nèi)毒素檢測(cè)試劑測(cè)定樣品中內(nèi)毒素活性，并與初始樣品比較。
注意事項(xiàng)：
1、DNA濃度>1mg/ml時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于DNA和蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)，清除程序可導(dǎo)致10-20％DNA丟失，所幸的是與清除內(nèi)毒素的艱難相比DNA更容易提取制備。
2、所有溶液應(yīng)用無內(nèi)毒素的高純水配制，所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發(fā)性水溶液可高壓120℃高溫處理。
內(nèi)毒素簡(jiǎn)介：
內(nèi)毒素（endotoxin）原稱熱原，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜及其它微生物細(xì)胞壁的主要組成成分，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖，主要由O-特異性鏈、核心多糖和類脂A三部分組成。脂多糖共價(jià)連接到非極性的疏水性類脂A（Lipid A）形成帶負(fù)電荷的大分子，同時(shí)還具有一個(gè)親水性的寡糖核，因而具有疏水和親水雙重性質(zhì)。制備質(zhì)粒DNA和重組蛋白時(shí)，細(xì)菌破壁之后將釋放大量脂多糖。無論是普通制備純化程序，還是離子交換、凝膠排阻過濾，甚至是氯化銫超速離心等制備程序，脂多糖任不可避免地與DNA或蛋白質(zhì)牢固結(jié)合而被共同純化。脂多糖具有強(qiáng)烈的免疫活性和細(xì)胞毒性，并能產(chǎn)生多種復(fù)雜的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)，大多數(shù)情況下會(huì)明顯干擾并產(chǎn)生不可預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如在DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，內(nèi)毒素競(jìng)爭(zhēng)性干擾轉(zhuǎn)染試劑與DNA的結(jié)合，顯著降低轉(zhuǎn)染效率，并產(chǎn)生明顯細(xì)胞毒性降低外源基因表達(dá)水平。
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